车间空气中磷胺卫生标准GB8778-1988

　　本标准适用于生产和使用磷胺的各类企业。

　　1　卫生要求

　　车间空气中磷胺最高允许浓度为0.02mg/m3(皮)。

　　2　监测检验方法

　　本标准的监测检验方法采用酶化学法，见附录A。

　　附录A

酶化学法

(补充件)

　　A.1　原理

　　磷胺对胆碱酯酶有抑制作用，而胆碱酯酶能促进乙酰胆碱的水解，乙酰胆碱的量可用氯化铁比色法定量测定，由此换算成磷胺的含量。

　　本法的检出下限为0.1μg/ml。

　　A.2　仪器

　　a.多孔玻璃板吸收管。

　　b.恒温水浴箱：37±0.5℃。

　　c.砂表。

　　d.分光光度计。

　　e.个体采样器。

　　A.3　试剂

　　A.3.1　吸收液：蒸馏水。

　　A.3.2　缓冲夜(pH=7.2):将16.72g磷酸氢二钠(Na2HPO4•12H2O)及2.72g磷酸二氢钾(KH2PO4)溶于1L水中。

　　A.3.3　氯化乙酰胆碱溶液：称0.1000g氯化乙酰胆碱，溶于100ml缓冲液(pH=7.2)，保存于冰箱内。

　　A.3.4　碱性羟胺溶液：临用前将下列溶液(1)及(2)等体积混合。

　　溶液(1)：13.9%盐酸羟胺溶液，保存于冰箱内。

　　溶液(2)：14%氢氧化钠溶液。

　　A.3.5　三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于100ml1∶2盐酸中。

　　A.3.6　10%氯化铁溶液：将10g氯化铁(FeCl3•6H2O)加到0.84ml盐酸及少量水中，微热使溶解，然后加水至100ml。

　　A.3.7　标准溶液：准确称取磷胺的纯品，溶于甲醇中，配成1ml含100mg磷胺的贮备液，保存于冰箱中，临用时取适量贮备液用吸收液稀释配成1ml含2μg磷胺。

　　A.3.8　胆碱酯酶溶液：以健康马血清为酶原，用缓冲液稀释成酶活力为70％－80％(见酶活力测定)，保存于冰箱中。

　　酶活力测定：取3ml健康马血清置于25ml容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度，以此马血清溶液按表A1配制酶活力标准管。各管分别加1ml水，置于37℃恒温水浴箱预热10min，然后向每管各加入1.0ml氯化乙酰胆碱溶液(每隔30s加一管)，准确地在37℃下反应30min，30min末，加入2ml碱性羟胺溶液(每隔30s加一管)，按顺序从水浴中取出强烈振摇4min，然后向各管加入1ml三氯乙酸溶液，摇匀后，加入1ml氯化铁溶液，振摇过滤，滤液在波长为520nm下测其吸光度，以水作参比液。用公式(B-X)/B×100(%)(式中B为零管的吸光度，X?为各管的吸光度)，得到氯化乙酰胆碱在37℃被酶水解30min的水解百分数，取水解百分数为70-80%的马血清作标准，根据马血清含量(25ml中含纯马血清毫升数)配制胆碱酯酶溶液。

　　表A1　酶活力标准管的配制

　　A.4　采样

　　取盛有5ml吸收液的多孔玻璃板吸收管做采样管，以0.5L/min的速度抽取10L空气。

　　A.5　分析步骤

　　用吸收管中吸收液洗涤进气管内壁3次，然后倒入10ml具塞比色管中，取1.0ml样品溶液置于25ml具塞比色管中，同时按表A2配制标准管。

　　表A2　磷胺标准管的配制

　　B管加1ml缓冲液，样品管和标准管(包括B管)放在37℃恒温水浴箱中预热10min，然后各管(除B管外)加入1.0ml胆碱酯酶溶液，每隔30s加一管，在恒温水浴箱中准确反应30min再向各管加入1.0ml氯化乙酰胆碱溶液(每隔30s加一管)，反应30min后(不时摇动)，每管加入2ml碱性羟胺溶液(每隔30s加一管)，按顺序从水浴中取出后强烈振摇4min，然后向各管中加入1ml三氯乙酸溶液，摇匀，加入1ml氯化铁溶液，振摇过滤，滤液在波长520nm下测其吸光度，并以水作空白参比液，将所得吸光度按下式计算出胆碱酯酶被磷胺抑制的百分数(或称百分抑制率)。

　　胆碱酯酶百分抑制率(%)=[1-(B-X)/(B-C)]×100=(X-C)/(B-X)×100......A1

　　式中：B、C--对照管B和C管的吸光度；

　　X--样品管的吸光度。

　　用磷胺含量对相应的胆碱酯酶百分抑制率绘制标准曲线，计算出样品的百分抑制率，再由标准曲线查出磷胺含量。

　　X=5C/V0........(A2)

　　式中：X-空气中磷胺的浓度，mg/m3；

　　C--所取样品溶液中磷胺的含量，μg；

　　V0--换算成标准状况下的采样体积，L。

　　A.6　注意事项

A.6.1每一批马血清，须测定其活力，如血清在冰箱中保存时间超过一个